- 尺寸限制(SEC)
- 亲和力(AC)
- 离子交换(IEX)
- 疏水相互作用(HIC)
- 一体机
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尺寸排除色谱(SEC)
SEC也被称为凝胶渗透色谱法(GPC),分离的组件分子大小当样品通过固定相时(一步)。
决定因素是固定相的孔径分布。然而,这不是一种筛分效应,而是一种扩散效应,因为大分子比小分子洗脱得快。
小分子能更好地渗透到孔隙中的固定相又如何在柱中停留的时间比大分子长,它们的运动空间更小,因此与洗脱液的夹带更强。因此,大分子先洗脱。
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亲和色谱(AC)
亲和层析是一种多步骤过程(结合、洗涤、洗脱),其特点是目标分子与柱状材料的特异性结合。因此,固定相的配体必须与目标分子匹配。在洗涤步骤中,除去样品的所有非特异性结合部分。随后的洗脱步骤释放目标分子。
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离子交换色谱法(IEX)
离子交换色谱法根据分子的总电荷来分离分子。
这是一个竞争过程,目标分子和样品中极性相同的所有分子首先“非特异性”结合到固定相上,然后逐渐洗脱(2步)。
例如,阳离子交换器用于带正电荷的目标分子。
固定相本身带相反的电荷,即带负电。与固定相的初始结合发生在低离子强度条件下,即与样品的流动相具有低电解质含量。用盐梯度进行洗脱。通过增加盐浓度,带弱电荷的蛋白质先洗脱,而在较高盐浓度下,带强电荷的蛋白质后洗脱。
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疏水相互作用色谱(HIC)
分离是基于疏水相互作用和梯度洗脱。
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多方法系统
在蛋白质纯化过程中,不同的方法通常结合在一个更复杂的纯化策略中。多方法系统可用于在一个系统上执行净化策略中使用的所有方法。

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